血液・一般検査
血球計算盤 算定法 BurkerTurk
ビルケルチュルク(Burker-Turk)計算盤は同ーの目盛が刻まれた2面の計算室をもち、各計算室の容積は0.9μLとなっています。
目盛標線は図-1のように縦横ともー辺の長さが3.000mmで、これが各三等分され全体が1mm×1mmの9個の大ブロックに区分されています。このうち中央の大ブロックTは、おもに赤血球(約5×10⁹個/mL、径7.5μm)、血小板、精子、酵母など絶対数の多い細胞等の算定に使用し、四隅の大ブロックW₁～W₄は、白血球(約7×10⁶個/mL、径10μm)、リンパ球、培養紬胞など絶対数の少ない細胞等の算定に使用します。以下白血球と赤血球の算定を例に説明します。
目盛標線は図-1のように縦横ともー辺の長さが3.000mmで、これが各三等分され全体が1mm×1mmの9個の大ブロックに区分されています。このうち中央の大ブロックTは、おもに赤血球(約5×10⁹個/mL、径7.5μm)、血小板、精子、酵母など絶対数の多い細胞等の算定に使用し、四隅の大ブロックW₁～W₄は、白血球(約7×10⁶個/mL、径10μm)、リンパ球、培養紬胞など絶対数の少ない細胞等の算定に使用します。以下白血球と赤血球の算定を例に説明します。
白血球算定法
四隅の大ブロックW₁～W₄は、図-1のように一辺の長さが1.000mmの正方形で、これが縦横4等分されそれぞれ16個のマス(小正方形)に区分されています。計算室の深さはカバーグラスをセットすると0.100(1/10)mmとなるので、各大ブロックの容積は1/10㎣、1マスの容積は1/160㎣となります。
- チュルク液等を用いて血液の10倍希釈液を作ります。1回の算定に使用する液量は計算室1面あたり約10μL、2室合計で約20μLです。血球以外の算定の場合は、1マスあたり細胞数が5～10個程度になるよう検体原液を希釈して下さい。希釈倍率の求め方：
検体原液1mLあたり推定細胞数をA個、求める希釈倍率をz倍とすると
(A/1,000×1マスの容積)/z＜10、したがって、z＞A/(1.6×10⁶) - 裏面記載の使用方法にしたがい希釈液を計算室に入れ、100倍顕微鏡下で図-1のW₁～W₄の中にある白血球をカウントします。
- はじめにW₁の左上のマスから数え始め、図-3の矢印の順序に従い16マス内を計数します。こうして4個の大ブロック内にある白血球をすべて数えます。境界線上にある白血球は、重複を避けるため、図-3のように相対する辺いずれか一方の線上にある物だけを数えます。
- 以上により求めた白血球総数をxとすると、血液1μL(1㎣)中の白血球数χは、X=x/4×10(計算室の深さ)×10(希釈倍率)=25x
●Xを1,000倍すると1mL中の白血球数になります
●希釈を行わない時は希釈倍率の数字を1にします
赤血球算定法
中央の大ブロックTは、図-2のように一辺の長さが1.000mmの正方形で、これが各20等分され一辺が0.050mmの400個のマス(小正方形)に区分されています。計算室の深さはカバーグラスをセッ卜すると0.100(1/10)mmとなるので、大ブロックの容積は1/10㎣、1マスの容積は1/4,000㎣となります。
- ピぺットを用いて希釈液(ハイエム液等）199、血液1の割合で200倍希釈液を作ります。1回の算定に使用する液量は計算室1面あたり約10μL、2室合計で約20μLです。血球以外の算定の場合は1マスあたり細胞数が5～10個程度になるよう検体原液を希釈してください。●希釈倍率の求め方：
検体原液1mLあたり推定細胞数をA個、求める希釈倍率をz倍とすると、(A/1,000×1マスの容積)/z＜10、したがって、z＞A/(4×10⁷) - 裏面記載の使用方法にしたがい希釈液を計算室に入れ、200倍顕微鏡下で赤血球をカウントします。
- 図-2の、3本線で区切られた16マスの集合体(中ブロック)①～⑤の中にある赤血球を数えます。はじめに①の左上のマスから数えはじめ、図-4の矢印の順序に従い16マス内を計数します。こうして5個の中ブロック内にある赤血球をすべて数えます。境界線上にある赤血球は、重複を避けるため、図-4のように相対する辺いずれか一方の線上にある物だけを数えます。
- 以上の5中ブロック(80マスに相当)内にある赤血球総数をrとすると、血液1μL(1㎣)中の赤血球数Rは、R=r×400/80×10(計算室の深さ)×200(希釈倍率)=10,000r
2面の計算室で同時に算定を行いその平均値を求めると、より正確な翼定結果が得られます
※上記算定法は一例です